將目的片段連在T載體之后，用相應(yīng)的酶為什么切不下來？

兩條帶都收了 然后測序唄

將原題貼上，話說的不明不白,我有點無法理解。如果理論上：用用sacⅡ單酶后能出現(xiàn)你的目的條帶，但實際上沒有酶切出目的條帶（t載體有），我認為原因是T載體自連，你的目的條帶沒有連上！建議重連，并用菌落P...

應(yīng)為PCR擴增出來的是混合物,酶切回收后才基本是純的目的片段. 載體一般不用PCR擴增,一般是質(zhì)粒來源,也需要用切口一致的酶消化回收. 之后連起來就好了

用的是T-simple嗎？如果不是simple載體，有可能切開的不是你引入的的沒切位點，而是載體本身的

我們用天根公司的膠回收試劑盒，回收目的基因及載體雙酶切后的產(chǎn)物用于連接，連接體系如下：一般載體1微升，目的基因8微升左右（沒.測OD）,用T4DNA連接酶（購于TaKaRa公司）1微升，再加酶緩沖液（...

接二連三 一個接著一個，接連不斷。 [拼音] jiē èr lián sān [出處] 清·曹雪芹《紅樓夢》第九十九回：“賈母還要將李紈等挪過來；為著元妃薨后；家中事情接二連三；也無暇及此?！?[例...

2000bp的片段屬于普通片段，常見載體都可以連接上，一般的普通T載體都可以使用。

不可以，高保真酶產(chǎn)物一般都是 平末端 。純化產(chǎn)物加taq酶，buffer和dNTP，72℃反應(yīng)10~30分鐘即可加尾，產(chǎn)物就可以直接與 T載體 連接了。

可能是質(zhì)粒在轉(zhuǎn)菌后部分堿基出現(xiàn)錯配或者突變導(dǎo)致你酶切的位置發(fā)生變化.因為你pcr擴增只是你引物的位置只要不突變就可以正常擴增.建議你做個測序.

一種限制性內(nèi)切酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并能在特定的切點上切割DNA分子