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我想問(wèn)一下從PCR開(kāi)始有帶膠回收雙酶切，載體雙酶切，膠回收后怎么把載體和酶切后的基因連在一起

2022-11-28 12:12

具體的步驟，謝謝

4個(gè)回答

2022-11-28 14:46

一般T4 DNA 連接酶就行啊，以及對(duì)應(yīng)的buffer，然后4度或16度過(guò)夜~

2022-11-28 14:19

我們用天根公司的膠回收試劑盒，回收目的基因及載體雙酶切后的產(chǎn)物用于連接，連接體系如下：一般載體1微升，目的基因8微升左右（沒(méi).測(cè)OD）,用T4DNA連接酶（購(gòu)于TaKaRa公司）1微升，再加酶緩沖液（2.5微升）和水至總體積25微升，16度過(guò)夜后第二天轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌。目的基因與載體的摩爾數(shù)比一般為3至10比1

2022-11-28 13:54

載體和目的基因用相同的內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，有了相同的缺口，在DNA連接酶的作用下就能夠連接了

2022-11-28 13:21

T4 DNA 連接酶。。。。

相關(guān)問(wèn)答

為什么質(zhì)粒雙酶切后顯得更大了？

1個(gè)回答2022-10-31 22:29

線(xiàn)性化的跑得最慢。質(zhì)粒酶切后，和沒(méi)有酶切的對(duì)照相比。應(yīng)該會(huì)多出一條帶，這條帶應(yīng)該是跑得最慢的，也就是顯得比原來(lái)的更大。酶切的不徹底的話(huà)，原來(lái)的那幾條帶也可能存在wjswj(站內(nèi)聯(lián)系TA)酶切之前你看...

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PCR擴(kuò)增出目的片段之后為什么要酶切?酶切下來(lái)的是目的片段和載體?然后再把它們連起來(lái)?很困惑.

1個(gè)回答2023-04-27 07:35

應(yīng)為PCR擴(kuò)增出來(lái)的是混合物,酶切回收后才基本是純的目的片段. 載體一般不用PCR擴(kuò)增,一般是質(zhì)粒來(lái)源,也需要用切口一致的酶消化回收. 之后連起來(lái)就好了

T載體與目的片段大小一致時(shí),怎么酶切回收啊

1個(gè)回答2022-09-11 05:48

兩條帶都收了然后測(cè)序唄

構(gòu)建載體雙酶切電泳后比目的片段pcr產(chǎn)物高

1個(gè)回答2022-10-27 20:41

可能是質(zhì)粒在轉(zhuǎn)菌后部分堿基出現(xiàn)錯(cuò)配或者突變導(dǎo)致你酶切的位置發(fā)生變化.因?yàn)槟鉷cr擴(kuò)增只是你引物的位置只要不突變就可以正常擴(kuò)增.建議你做個(gè)測(cè)序.

限制性?xún)?nèi)切酶的工作原理

1個(gè)回答2024-02-29 06:33

一種限制性?xún)?nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子

質(zhì)粒雙酶切后怎么會(huì)這個(gè)樣子

1個(gè)回答2022-12-27 10:50

酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認(rèn)為這三條帶從上到下一次是線(xiàn)性、開(kāi)環(huán)、超螺旋.其實(shí)可能會(huì)比這條帶更多些,可以認(rèn)為是中間復(fù)合體狀態(tài). 酶切后,因?yàn)槌菪隣顟B(tài)的質(zhì)粒被切成線(xiàn)性,所以條帶會(huì)有一條條帶.如...

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雙酶切質(zhì)粒后電泳的問(wèn)題

2個(gè)回答2022-08-31 16:57

很顯然是質(zhì)粒發(fā)生了自連啦。切開(kāi)的2個(gè)質(zhì)粒連起來(lái)了，因此相當(dāng)于2個(gè)質(zhì)粒的大小。你需采用磷酸化避免自連發(fā)生。

酶切后PCR一條帶都沒(méi)有但原質(zhì)粒PCR有條帶為什么

2個(gè)回答2022-09-04 08:38

什么酶呢？最后酶切組的電泳條帶是彌散，是只有質(zhì)粒條帶沒(méi)有酶切產(chǎn)物條帶，還是干脆就是空白？如果是彌散，最有可能的是所用的酶的反應(yīng)條件要求比較嚴(yán)格，因?yàn)檎莆詹划?dāng)而產(chǎn)生了星號(hào)活性，導(dǎo)致把質(zhì)粒切碎了。建議...

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構(gòu)建載體的時(shí)候，先用設(shè)計(jì)好的引物PCR所要的目的基因，再和T載體連接，再轉(zhuǎn)化，再小抽，再雙酶切，再和

1個(gè)回答2022-09-23 04:51

理論上講PCR產(chǎn)物可以直接酶切連接反應(yīng)。但是，以PCR產(chǎn)物酶切的時(shí)候沒(méi)有辦法證明雙酶切是否成功、徹底（PCR產(chǎn)物會(huì)有ployA的存在必須切掉，但是PCR產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物大小差別不大）。而以T載體為媒介...

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將目的片段連在T載體之后，用相應(yīng)的酶為什么切不下來(lái)？

1個(gè)回答2022-08-02 15:43

酶發(fā)揮作用時(shí)，外部環(huán)境要有對(duì)應(yīng)的溫度，PH，如果外部環(huán)境不合適，酶也不能正常發(fā)揮作用。

我想問(wèn)一下從PCR開(kāi)始有帶膠回收雙酶切，載體雙酶切，膠回收后怎么把載體和酶切后的基因連在一起

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