連接轉(zhuǎn)化后提質(zhì)粒做酶切，可以切出帶，做質(zhì)粒PCR卻P不出來，為什么

什么酶呢？最后酶切組的電泳條帶是彌散，是只有質(zhì)粒條帶沒有酶切產(chǎn)物條帶，還是干脆就是空白？ 如果是彌散，最有可能的是所用的酶的反應(yīng)條件要求比較嚴(yán)格，因?yàn)檎莆詹划?dāng)而產(chǎn)生了星號(hào)活性，導(dǎo)致把質(zhì)粒切碎了。建議...

線性化的跑得最慢。 質(zhì)粒酶切后，和沒有酶切的對(duì)照相比。應(yīng)該會(huì)多出一條帶，這條帶應(yīng)該是跑得最慢的，也就是顯得比原來的更大。酶切的不徹底的話，原來的那幾條帶也可能存在wjswj(站內(nèi)聯(lián)系TA)酶切之前你看...

因?yàn)?轉(zhuǎn)化過程你沒出來好 加點(diǎn) kml 再轉(zhuǎn)化 提質(zhì)后 分別切2 這樣就正確了

很顯然你的質(zhì)粒沒有構(gòu)建成功。感覺是連接出了問題，pBI121載體很大，回收比較困難，建議你測(cè)一下回收后的濃度。如果太低的話，建議加大酶切量。121載體至少應(yīng)該達(dá)到50-100ng，然后再按1:3-10...

酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認(rèn)為這三條帶從上到下一次是線性、開環(huán)、超螺旋.其實(shí)可能會(huì)比這條帶更多些,可以認(rèn)為是中間復(fù)合體狀態(tài). 酶切后,因?yàn)槌菪隣顟B(tài)的質(zhì)粒被切成線性,所以條帶會(huì)有一條條帶.如...

可能是兩個(gè)載體互連了,你酶切了跑膠分析一下長(zhǎng)度就清楚了. 原因基本跑不了載體互連、多個(gè)片段互連,或者根本沒提出來,而是把細(xì)菌基因組給弄出來了,這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程,仔細(xì)看一下膠上有沒有條...

可能是兩個(gè)載體互連了，你酶切了跑膠分析一下長(zhǎng)度就清楚了。 原因基本跑不了載體互連、多個(gè)片段互連，或者根本沒提出來，而是把細(xì)菌基因組給弄出來了，這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程，仔細(xì)看一下膠上有沒有條帶什...

很顯然是質(zhì)粒發(fā)生了自連啦。切開的2個(gè)質(zhì)粒連起來了，因此相當(dāng)于2個(gè)質(zhì)粒的大小。你需采用磷酸化避免自連發(fā)生。

你做完菌落PCR以后，電泳完要看看是不是你需要的那一條帶，如果這條帶是你要的話，你就要拿你用來菌落PCR的菌液拿去測(cè)序就可以了，因?yàn)槲移綍r(shí)也是做菌落PCR，而且提取質(zhì)粒是檢測(cè)不出來的，但是菌落PCR以...

重組質(zhì)粒是把載體質(zhì)粒酶切開，連接上PCR片段，然后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)后提質(zhì)粒獲得的，這一系列過程中都無法檢測(cè)目的基因是否連接成功了，是否轉(zhuǎn)化成功了，只有對(duì)轉(zhuǎn)化后的菌再次提質(zhì)粒、酶切檢測(cè)或PCR檢測(cè)才...