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雙酶切連接后轉(zhuǎn)化，長出了菌落，但提質(zhì)粒跑電泳，分子量比目的質(zhì)粒大很多，為什么

2022-09-27 14:25

2個回答

可能是兩個載體互連了，你酶切了跑膠分析一下長度就清楚了。
原因基本跑不了載體互連、多個片段互連，或者根本沒提出來，而是把細菌基因組給弄出來了，這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程，仔細看一下膠上有沒有條帶什么的。
不著急，原因很多，逐個分析。

目的質(zhì)粒是什么？

1個回答2023-01-04 20:31

可能是兩個載體互連了,你酶切了跑膠分析一下長度就清楚了. 原因基本跑不了載體互連、多個片段互連,或者根本沒提出來,而是把細菌基因組給弄出來了,這樣你就要檢查一下提質(zhì)粒的過程,仔細看一下膠上有沒有條...

2個回答2022-08-31 16:57

很顯然是質(zhì)粒發(fā)生了自連啦。切開的2個質(zhì)粒連起來了，因此相當于2個質(zhì)粒的大小。你需采用磷酸化避免自連發(fā)生。

1個回答2023-05-22 05:30

都有可能你可以多做幾個對照,如空載體轉(zhuǎn)化、空細胞涂板等等，幫助縮問題小范圍你可以詢問實驗室其他人員，看看酶是否有問題，感受態(tài)是否有問題，抗生素是否有問題，等等按你給的線索，菌落很少，很有可能是切...

1個回答2022-10-31 22:29

線性化的跑得最慢。質(zhì)粒酶切后，和沒有酶切的對照相比。應該會多出一條帶，這條帶應該是跑得最慢的，也就是顯得比原來的更大。酶切的不徹底的話，原來的那幾條帶也可能存在wjswj(站內(nèi)聯(lián)系TA)酶切之前你看...

1個回答2022-12-27 10:50

酶切前,質(zhì)粒電泳圖一般是三條條帶,并認為這三條帶從上到下一次是線性、開環(huán)、超螺旋.其實可能會比這條帶更多些,可以認為是中間復合體狀態(tài). 酶切后,因為超螺旋狀態(tài)的質(zhì)粒被切成線性,所以條帶會有一條條帶.如...

1個回答2023-02-10 17:35

先一步步找原因。是實驗步聚問題，還是試劑盒的問題，如果是試劑盒的問題，推薦您用鼎國生物的。價格應該還實惠點。

2個回答2023-01-28 07:00

因為轉(zhuǎn)化過程你沒出來好加點 kml 再轉(zhuǎn)化提質(zhì)后分別切2 這樣就正確了

1個回答2022-11-14 05:01

1.用水不會有太大影響，只是質(zhì)粒在水中保存不如在elution中穩(wěn)定，最好還是用試劑盒的elution；2.你提的質(zhì)粒是連有目的基因的話，可以空載在前，中間是marker，后邊重組質(zhì)粒，一般如果目的基...

1個回答2023-01-20 06:45

你做完菌落PCR以后，電泳完要看看是不是你需要的那一條帶，如果這條帶是你要的話，你就要拿你用來菌落PCR的菌液拿去測序就可以了，因為我平時也是做菌落PCR，而且提取質(zhì)粒是檢測不出來的，但是菌落PCR以...

1個回答2023-01-23 11:43

無外乎于試劑盒不合適，菌液過少，或過多導致裂解不充分。試劑盒問題比較大，可以其他菌液做個對照，就很清楚了當然如果是農(nóng)桿菌的話，那質(zhì)粒量少是很正常的，不像大腸桿菌質(zhì)粒那么容易提取出來。

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