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關(guān)于克隆的問題。假如我有有一個(gè)基因片段，未知序列。我可以把它連接到T載體，然后PCR

2022-06-26 17:23

PCR 用T載體PRIMER,然后測序，然后酶切出片段---------》從而達(dá)到得到很多此片段的目的。這個(gè)做法行么？或者別的做法，推薦下

3個(gè)回答

2022-06-26 21:37

不行~
你得先用TAQ酶講這個(gè)片段過一個(gè)循環(huán)的PCR 這樣在后面加了A才可以連T載體然后轉(zhuǎn)化涂板搖菌提質(zhì)粒測序

2022-06-26 21:26

T載體分兩種。一種是末端帶有A的典型的T載體，這樣的T載體可以與taq酶擴(kuò)增出來的片段連接，另一種是平末端的T載體，這種T載體末端沒有A，它用于以pfu或者是phusion這樣的高/超保真酶擴(kuò)增出來的片段的連接，因?yàn)槟愕男蛄惺俏粗?，為保萬無一失，建議你最好先用taq給它處理下，即末端加A然后再和含有A的T載體連接，然后再用M13測序。

2022-06-26 18:54

恩，你這是最簡單的方法了。大家都是這么做的。

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PCR擴(kuò)增的X基因片段與克隆載體連接

1個(gè)回答2022-09-14 15:27

已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因片段和克隆載體→對(duì)兩者分別進(jìn)行酶切（選要相同的限制性內(nèi)切酶對(duì)兩者進(jìn)行切割）→酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收→克隆載體和目的基因進(jìn)行連接（一般選用T4連接酶）→大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制...

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求助，怎么克隆一段未知序列的基因

1個(gè)回答2022-10-27 21:53

如果時(shí)間允許就先分離純化該酶蛋白，然后作質(zhì)譜分析其C端和N端序列，然后據(jù)此設(shè)計(jì)引物，克隆分析。（轉(zhuǎn)載，僅供參考）

為什么基因測序前將基因PCR克隆后還要放到大腸桿菌載體上再測序？

4個(gè)回答2022-07-12 09:06

補(bǔ)充一個(gè)更重要和實(shí)際的考慮：實(shí)際測序中，可靠的測序結(jié)果往往是從引物后二三十個(gè)堿基才開始的。如果片段比較長，超過一次測序能力如七八百之外，即使雙向測序也無法獲得引物（排除非特異擴(kuò)增）或緊鄰引物處的序列時(shí)...

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為什么基因測序前將基因PCR克隆后還要放到大腸桿菌

1個(gè)回答2022-12-05 23:10

大腸桿菌是一種載體，要是因?yàn)闇y序的原因，獲得的全長序列要經(jīng)過測序驗(yàn)證，而目前的測序技術(shù)有限，在序列的起始端準(zhǔn)確性不高，所以想要獲得準(zhǔn)確的全長序列就需要克隆到載體上。具體可以了解一下測序的原理。

克隆測序和PCR產(chǎn)物直接測序有哪些不一樣

1個(gè)回答2022-10-01 19:32

眾所周知PCR壙增程現(xiàn)錯(cuò)配現(xiàn)象能所錯(cuò)配都發(fā)同位置PCR片段直接測序其結(jié)PCR片段眾混合物結(jié)某點(diǎn)現(xiàn)幾十錯(cuò)配現(xiàn)象數(shù) （或許幾十萬）點(diǎn)應(yīng)該確測序錯(cuò)配現(xiàn)象反映 PCR片段直接測序結(jié)反映PCR用模板原始結(jié)PCR...

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為什么pcr產(chǎn)物可以直接連t載體

1個(gè)回答2022-12-16 10:24

普通的taq聚合酶會(huì)在PCR反應(yīng)過程中在3’末端加入一個(gè)堿基A，線性化平末端T載體的兩端分別又人工加上一個(gè)額外的T堿基，從而可與PCR克隆產(chǎn)物的A末端互補(bǔ)配對(duì)，提高了PCR產(chǎn)物連接和克隆的效率。

T載體的作用是什么？克隆時(shí)為什么要用T載體？

1個(gè)回答2022-10-06 04:39

我做過幾個(gè)克隆，沒用過T載體，直接將酶切后純化的產(chǎn)物進(jìn)行連接，照樣可以連接成功，基本上都會(huì)有10-50個(gè)克隆長出來。我用的是Sal I和Nde I這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，似乎這兩個(gè)都是平端的哦。

基因克隆載體連接步驟

1個(gè)回答2023-01-18 05:40

基因克隆的步驟： 1、獲取目的基因； 2、將目的基因與載體連接； 3、重組體載入受體細(xì)胞； 4、重組體的篩選、克隆。具體到載體連接這一步，將酶切后的載體與目的片段加入相應(yīng)的連接體系中就可以了。

請(qǐng)問PCR產(chǎn)物直接測序和克隆后再測序有什么區(qū)別，用PCR產(chǎn)物直接測序不是更省時(shí)間嗎，省得再連到載體上了啊

3個(gè)回答2023-05-14 21:59

PCR產(chǎn)物直接測序，引物端約有幾十個(gè)堿基是測不出來的，如果你恰好關(guān)注這個(gè)位置，那么或者從另一端測通（你的產(chǎn)物不長），或者克隆測序此外，很多時(shí)候由于PCR產(chǎn)物不專一，直接測序效果不好，而克隆測序沒這個(gè)...

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PCR的目的片段與載體連接的目的是什么？

1個(gè)回答2023-04-19 09:30

那得看你用多少濃度的膠跑，如果用1%的瓊脂糖電泳30min，你的主帶（超螺旋的閉環(huán)質(zhì)粒dna）會(huì)在3kb-2kbmarker之間，如果是單酶切產(chǎn)物，則應(yīng)該在3.5kb的marker附近。

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