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肯定是開(kāi)環(huán)，不然怎么連接。連接的原理就是試劑盒中的載體pMD19-T是已經(jīng)經(jīng)過(guò)內(nèi)切酶EcoRv反應(yīng)了的，并且在露出T的一端繼續(xù)添加幾個(gè)T，而我們的PCR反應(yīng)中，在聚合酶的作用下，會(huì)在一端添加A，這樣它們?cè)诜磻?yīng)中就很快連接成功。

跑膠估計(jì)就是用你的樣品，和DNA marker中已知量的條帶的亮度比例，來(lái)估算你的樣品的DNA樣品。這個(gè)需要一定的經(jīng)驗(yàn)。例如一般的1KB ladder，最亮的條帶在點(diǎn)樣3微升時(shí)為50ng，那么你看你的條帶的亮度大約是ladder條帶亮度的10倍的話，你就知道你點(diǎn)的樣大約是500ng了。

比例的話盡量保持在10：1~3：1間，太少會(huì)降低連接效率，拿不到克隆，太高浪費(fèi)，也會(huì)造成非預(yù)料的連接結(jié)果。

明白了么？

YAC: 酵母人工染色體 230-1700Kb
BAC: 細(xì)菌人工染色體 300Kb
PAC: P1人工染色體 300Kb

2000bp的片段屬于普通片段，常見(jiàn)載體都可以連接上，一般的普通T載體都可以使用。

可以，但是不知道你所謂的暫停了幾個(gè)小時(shí)是在什么條件下暫停的。一般來(lái)說(shuō)連接效果會(huì)有所降低，但是，因?yàn)槊總€(gè)人用的連接溫度不一樣，應(yīng)該不影響后續(xù)試驗(yàn)吧。

可能是忘記打了

“載”用的巧妙，暗示了老葉與新芽、嫩樹(shù)承上啟下的關(guān)系，頗為巧妙。

記載（zǎi） 載（zài）重 超載（zài）

要去土豆網(wǎng)才可以看到啊，版權(quán)問(wèn)題啊