提取的DNA模版濃度均低于50ng/ul,做25微升體系的PCR,模版應(yīng)該加多少微升?
2個(gè)回答
可以稍微大一點(diǎn),加3ul試一試,不過模板這個(gè)要求不太高,關(guān)鍵是你的引物設(shè)計(jì)的質(zhì)量還有DNA聚合酶的活性,據(jù)說不是有人做過“單分子PCR”嗎?
而且委屈委屈委屈委屈委屈委屈委屈我
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pcr反應(yīng)模板DNA濃度最低要求是多少?
模板DNA濃度主要看你的PCR擴(kuò)增體系所使用的酶,一般普通的酶的話DN模板量在50到100ng都可以擴(kuò)增出來的,高效一點(diǎn)的酶的話幾ng也可以擴(kuò)增出來的。
為什么pcr的時(shí)候,DNA模板濃度高了,會(huì)有拖尾?
DNA模板濃度高了,不僅會(huì)有拖尾,還可能會(huì)沒有PCR條帶。 特別是在DNA模板純度不純的時(shí)候,會(huì)對PCR起抑制作用。 PCR反應(yīng)中,模板只要1ng就可以,所以模板濃度不要太高。
模板的濃度對PCR有什么影響,一般要多大濃度?
要看用的是什么模板了,pcr的靈敏度很高,幾pg的DNA就能檢測出來,一般用pcr產(chǎn)物或者質(zhì)粒做模板,只需要1ng左右就可以,如果是基因組或者cDNA做模板,模板量可適當(dāng)增加。 PCR指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)...
全文模板的濃度對PCR有什么影響,一般要多大濃度?
那要看你用的是什么模板了。 pcr的靈敏度很高,幾pg的DNA就能檢測出來了。一般用pcr產(chǎn)物或者質(zhì)粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因組或者cDNA做模板,模板量可適當(dāng)增加。
我想問PCR擴(kuò)增時(shí)使用的DNA模板濃度一般多大?加多少?
我們一般不去特意檢測提取的得到的模板濃度,純度倒是要注意一下,紫外分光達(dá)到1.8即可,不過我們一般也不去檢測. PCR的時(shí)候可以設(shè)置梯度,分別加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μ...
全文我想問PCR擴(kuò)增時(shí)使用的DNA模板濃度一般多大?加多少?
我們一般不去特意檢測提取的得到的模板濃度,純度倒是要注意一下,紫外分光達(dá)到1.8即可,不過我們一般也不去檢測。 PCR的時(shí)候可以設(shè)置梯度,分別加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μ...
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