載體構(gòu)建時(shí)平末端連接連接效率很低，怎樣才能提高其連接效率？

1）目的片段和載體的質(zhì)量最好高一些。
2）按照常規(guī)連接體系進(jìn)行，一般20ul體系。
3））連接溫度20-25度。由于平端連接不涉及粘性末端的互補(bǔ)，所以溫度可以高一些。
4）酶的用量不要過量，按照說明就可以。
5）連接時(shí)間至少4h，能過夜就過夜。
6）轉(zhuǎn)化的時(shí)候：休克后加入培養(yǎng)基，孵育50min，最多不超過1h，轉(zhuǎn)速不要高，大約150-170rpm。然后稍加離心棄去上清，留下大約200ul涂板子就可以了。