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通過(guò)設(shè)計(jì)帶酶切位點(diǎn)的PCR引物來(lái)使目的片段添加限制性酶切位點(diǎn)的原理是什么？百思不得其解，請(qǐng)教各位！

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通過(guò)設(shè)計(jì)帶酶切位點(diǎn)的PCR引物來(lái)使目的片段添加限制性酶切位點(diǎn)的原理是什么？百思不得其解，請(qǐng)教各位！

2022-11-05 05:59

我的意思是說(shuō)引物人為添加上的酶切位點(diǎn)與要擴(kuò)增的片段也不匹配，怎么能隨著引物克隆到目的片段上，而使目的片段帶上酶切位點(diǎn)的序列呢？原理是什么呢？
2022-11-05 06:53
大哥 我也沒(méi)想清楚，要是你知道了，跟我也說(shuō)聲 什么原理??？
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2022-11-05 10:35
不是隨意添加。酶切位點(diǎn)都加在引物的5‘端。這樣在第一輪擴(kuò)增后，就會(huì)產(chǎn)生有酶切位點(diǎn)的產(chǎn)物了(酶切位點(diǎn)在產(chǎn)物的兩端）。在接下來(lái)的擴(kuò)增中每個(gè)產(chǎn)物就都會(huì)有了。PCR的時(shí)候可以耐受引物的5‘端由數(shù)個(gè)不匹配的堿基對(duì)。但是隨著擴(kuò)增的進(jìn)行，產(chǎn)物都有這些位點(diǎn)后，就不存在不匹配的問(wèn)題了
2022-11-05 07:22
我要知道就好了
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